Tubulin-Isotypen in Cysten von Reticulomyxa

Abb. 91 Vergleich zwischen Zellextrakten aus Cysten und aktiven Zellen Die Taschen des abgebildeten Gels enthalten: M = Molekulargewichtsmarker; R= Reticulomyxa-Zellextrakt; C = Cysten-Zellextrakt; T = Hirntubulin. Leider sind die oberen Bereiche des Gels durch einen Fehler nicht durchgehend gefärbt. Trotzdem erkennt man, daß die Tubulin-Bande (Pfeil) in allen Reticulomyxa-Aufarbeitungen ungefähr gleich stark ist. Im niedermolekularen Bereich zeigt das Gel bei den Reticulomyxa-Zellextrakten gegenüber den Cystenextrakten ein eher verwaschenes Bandenmuster infolge von Proteolyse.

 

Abb. 92 a - c Western Blot von Reticulomyxa und Cysten Die Beschriftung der Taschen des Gels ist wie in Abb. 91. Zum Vergleich der relativen Proteinkonzentrationen wurden alle Zellextrakte auf 1 mg Protein / ml eingestellt; das Hirntubulin wurde etwas stärker verdünnt.

Abb. 92a Western Blot mit dem mAK ID5 gegen detyrosiniertes Tubulin Es zeigt sich, daß alle Proteinaufarbeitungen mit diesem Antikörper reagieren. Die Bandendicke in aktiven Zellen und Cysten ist ungefähr gleich groß, was auf einen gleichen Anteil des Tubulins am Gesamtprotein der Zelle hinweist.

Abb. 92b Western Blot mit dem mAK YL 1/2 gegen tyrosiniertes Tubulin Bis auf das Hirntubulin reagiert keine der Aufarbeitungen mit diesem Antikörper. Sowohl in den aktiven Zellen als auch in den Cysten von Reticulomyxa liegt kein mit diesem Antikörper markierbares tyrosiniertes Tubulin vor.

Abb. 92c Western Blot mit dem mAK YOL 1/34 gegen a-Tubulin Normalerweise reagieren die Zellextrakte von Reticulomyxa nicht mit diesem Antikörper im Western Blot. In diesem Fall fand jedoch aus ungeklärten Ursachen eine eindeutige Antikörperreaktion statt. Der Vergleich mit Abb. 92a zeigt, daß die Bande, die durch den mAK YOL 1/34 markiert wird, im Verhältnis zum Hirntubulin höher liegt, als diejenige, die durch den Antikörper ID5 gebunden wird. Es handelt sich also wahrscheinlich nicht um identische Isoformen des Tubulins.

 

Abb. 93 2D-PAGE von Cystenproteinen Dieses Gel zeigt die Proteinverteilung in Cysten von Reticulomyxa (12% - Gel). Der Vergleich mit dem Proteinmuster in aktiven Zellen zeigt, daß im niedermolekularen Bereich einige stärker alkalische Proteine (Pfeile) hinzugekommen sind, die möglicherweise aus der Cystenhülle stammen.

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